HPLC Analyst

En HPLC analyst er specialiseret i én teknik: højtryksvæskekromatografi. Prøven pumpes gennem en søjle. Stofferne kommer ud på forskellige tidspunkter. Detektoren tegner toppe, og hver top er et stof.

Metoden er som regel givet på forhånd. Din opgave er at køre den rigtigt, hver gang, og kunne dokumentere det.

Typiske opgaver

• Gøre prøver klar: afveje, opløse, fortynde og filtrere gennem 0,45 eller 0,22 mikrometer filter
• Lave mobilfase, afgasse og pH-justere buffere
• Montere søjle, ækvilibrere systemet og lade trykket stabilisere
• Køre systemegnethedstest før hver sekvens: tailing, teoretiske plader, RSD på gentagne injektioner
• Opsætte sekvenser med blanks, standarder, kontrolprøver og prøver
• Integrere toppe og regne indhold, renhed og urenheder ud
• Sammenligne resultater med specifikationen og markere OOS-resultater
• Køre stabilitetsprøver efter fastlagte tidspunkter
• Vedligeholde systemet: skifte pumpepakninger, rense injektor, udskifte forsøjle
• Fejlsøge basislinjestøj, spøgelsestoppe, trykfald og drift i retentionstiden
• Kalibrere udstyr og dokumentere det i logbogen
• Skrive analyseprotokoller og afvigelsesrapporter

En almindelig dag
Dagen starter med at hente nattens data. Sekvensen kørte færdig klokken fire. Du tjekker systemegnetheden først. Var standarderne inden for grænserne? Ellers er hele kørslen ugyldig, og prøverne skal køres om.

Derefter integrerer du. Nogle toppe er ikke skarpe. Du vurderer, om baselinjen ligger rigtigt, og du dokumenterer hver manuel integration. Det bliver kigget efter ved audit.

Formiddagen går ofte med prøveforberedelse til næste kørsel. Det er præcisionsarbejde. En unøjagtig afvejning eller en glemt fortynding ødelægger hele serien.

Om eftermiddagen sætter du natsekvensen op. Ind imellem er der fejlsøgning. Trykket stiger langsomt — det er ofte forsøjlen. Retentionstiden drifter — det er ofte mobilfasen eller temperaturen.

Dokumentation fylder mere end laboratoriearbejdet
I en GMP-afdeling er et resultat kun gyldigt, hvis det kan spores. Hvem kørte prøven? Hvilket søjlelotnummer? Hvilken standard, og hvornår udløb den? Alt skrives ned, mens det sker. Rettelser laves med streg og initialer, aldrig med overstregning.

Det er rutinearbejde — og det er meningen
En HPLC analyst udvikler sjældent nye metoder. Metoden er valideret og skal køres ens. Det passer godt til nogle og dårligt til andre. Du skal kunne holde koncentrationen om den hundrede prøve, der ligner de nioghalvfems andre.

Hvor arbejder man

• Kvalitetskontrol i medicinalvirksomheder, både på råvarer og færdige produkter
• Stabilitetsafdelinger, der følger produkter over måneder og år
• Kontraktlaboratorier og CRO'er, der analyserer for andre virksomheder
• Enzym-, protein- og biotekvirksomheder
• Fødevarevirksomheder med vitaminer, tilsætningsstoffer og restkoncentrationer
• Miljølaboratorier med vand- og jordprøver
• Kosmetik- og kemivirksomheder
• Retskemiske og toksikologiske laboratorier
• Hospitalslaboratorier med lægemiddelmonitorering

Karriereveje

• Superbruger på kromatografisoftwaren, fx Empower eller Chromeleon
• Metodeansvarlig med ansvar for overførsel og revalidering
• Skifte til analytisk udvikling, hvor metoderne opfindes i stedet for at køres
• Skifte til QA, hvor du reviewer andres data i stedet for at producere dem
• Teamkoordinator eller laboratorieleder i QC
• Applikationsspecialist eller servicetekniker hos Waters, Agilent, Thermo Fisher eller Shimadzu
• Specialist i LC-MS, hvis du vil videre fra UV-detektion

Hvilken lovgivning dækker denne rolle?
Titlen kræver ingen autorisation, men arbejdet er stramt reguleret. I medicinalindustrien udføres analyserne efter EU's GMP-regler, som Lægemiddelstyrelsen fører tilsyn med, og analysemetoderne følger monografierne i Den Europæiske Farmakopé. Metodevalidering sker efter ICH-retningslinjerne, især ICH Q2. Elektroniske data og audit trail i kromatografisoftwaren skal leve op til EU GMP Annex 11 og FDA's 21 CFR Part 11. Akkrediterede laboratorier arbejder desuden efter ISO 17025 under tilsyn af DANAK, og håndtering af opløsningsmidler som acetonitril og methanol følger Arbejdstilsynets regler om stoffer og materialer.

Den mest almindelige vej er laborantuddannelsen. Det er en erhvervsakademiuddannelse på 2½ år, i alt 150 ECTS, med cirka et års lønnet praktik. Den udbydes blandt andet af Københavns Erhvervsakademi, Erhvervsakademi Aarhus og UCL Erhvervsakademi og Professionshøjskole. Praktikken sker ofte i netop et analyselaboratorium, og mange får deres første HPLC-erfaring der.

Adgangskrav til laborantuddannelsen
Ifølge Uddannelsesguiden kræves gymnasial eksamen med matematik C og kemi C. Bioteknologi A kan træde i stedet for kemi. Du kan også komme ind med en relevant erhvervsuddannelse plus de samme fag. Mangler du kemi C, kan det tages som enkeltfag på VUC eller som gymnasialt suppleringskursus.

Andre veje ind i faget

• Bioanalytiker, en professionsbachelor på 3½ år. Bruges især på hospitalslaboratorier, men også i industrien.
• Professionsbachelor i laboratorie-, fødevare- og procesteknologi som top-up efter laborantuddannelsen, typisk 1½ år.
• Universitetsbachelor eller kandidat i kemi, farmaci eller biokemi. Nogle starter som analyst og rykker videre til metodeudvikling.
• Procesoperatør eller anden teknisk erhvervsuddannelse plus intern oplæring. Det sker, men er sjældnere i GMP-laboratorier.

Oplæringen sker på jobbet
Ingen uddannelse gør dig til færdig HPLC analyst. Selve teknikken lærer du i den virksomhed, du bliver ansat i. Der er typisk en oplæringsplan med underskrifter, før du må køre prøver selvstændigt. Regn med nogle måneder, før du er kvalificeret på de første metoder.

Hvad der tæller ved ansættelse
Hands-on-timer på instrumentet vejer tungest. Kender du Empower eller Chromeleon, står det næsten altid i jobopslaget. Erfaring med at arbejde under GMP er et stærkt kort, fordi dokumentationsdisciplinen er svær at lære fra en bog.

Omhu og tålmodighed nævnes ofte, og det er ikke bare en floskel her. Arbejdsgivere spørger til, hvordan du har håndteret en fejl, du selv opdagede.

Kurser der bruges i branchen
Efteruddannelse foregår gennem korte kurser i GMP, datapålidelighed og fejlsøgning på HPLC. Instrumentleverandørerne holder kurser i deres egne systemer og software. Der findes også kurser i metodevalidering og i overgangen fra HPLC til UHPLC. Mange virksomheder betaler den slags kurser.

Instrumenter

• HPLC- og UHPLC-systemer fra Waters, Agilent, Thermo Fisher eller Shimadzu
• Detektorer: UV, DAD (diode array), RI, fluorescens og ELSD
• LC-MS på nogle laboratorier, når UV ikke er følsomt nok
• Autosampler med køling til prøver, der ikke tåler stuetemperatur
• Søjleovn, så retentionstiden ikke drifter med rumtemperaturen

Søjler og forbrugsvarer

• Omvendt fase-søjler, oftest C18, men også C8, phenyl og HILIC
• Forsøjler, der skal skiftes, før hovedsøjlen tager skade
• Søjler til størrelsesudelukkelse og ionbytning ved proteinanalyse
• Sprøjtefiltre på 0,45 og 0,22 mikrometer
• Vials, septa og indsatser til små prøvevolumener
• HPLC-kvalitet acetonitril, methanol og Milli-Q-vand

Prøveforberedelse og bænkudstyr

• Analysevægt med fem decimaler
• Måleklober, pipetter og fortyndingsrækker
• Ultralydsbad til opløsning og afgasning
• Vortex, centrifuge og magnetomrører
• pH-meter til buffere
• Fastfaseekstraktion (SPE), hvor matrixen er besværlig
• Milli-Q-anlæg til rent vand

Software

• Empower fra Waters, Chromeleon fra Thermo Fisher eller OpenLab fra Agilent
• LIMS til prøvestyring og frigivelse af resultater
• Elektronisk labjournal (ELN)
• Excel med låste beregningsark til indhold og renhed
• Systemer til audit trail review, der viser hvem der ændrede hvad

Kvalitet og sporbarhed

• Certificerede referencestandarder med udløbsdato og lotnummer
• Systemegnethedstest før hver sekvens
• Kontrolkort, der viser om metoden driver over tid
• Logbøger for søjler, instrumenter og mobilfaser
• Kalibrerings- og vedligeholdsplaner

Fejlsøgning er en færdighed i sig selv
De fleste HPLC-problemer går igen. Stigende tryk peger på en tilstoppet forsøjle eller filter. Brede toppe kan skyldes en slidt søjle eller for stort injektionsvolumen. Spøgelsestoppe kommer ofte fra en forurenet mobilfase. Luftbobler i pumpen giver ustabilt tryk. En erfaren analyst kan læse kromatogrammet og gætte fejlen, før fejlsøgningen starter.